PCR出现只用上游引物就能引出片段的情况！怎么解释

2025-01-27 12:47:33

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回答1：

你要看看是不是你的上游引物能在你的模板的下游反向结合，然后两个上有引物拉出的中间的一段。也就是说，出现了错配。
你在用PP5设计引物时，一定要注意是否出现了错配、错配可能会拉出的条带大小。有时候PP5会漏判出现错配的情况（这个我发现过很多次了）。如果大小类似，建议你测序验证。

建议重新设计引物。

回答2：

可能是随机扩增吧。
看看产物另一端有没有相似序列。
你的引物长度？目的片段长度？扩增产物长度？

回答3：

首先，只有测序结果能够反映引物的扩增特异性，采用软件预测的扩增特异性最终需要实验来检验，所以说你选择Primer5.0出现这样的问题是完全可以理解的。
其次，用一条引物是可以扩增出产物的，而且该产物和目的产物也有一定的联系，起码开始的一段序列它们是相同的。但是必须注意：你用一条引物扩增出的产物有可能比你的目的产物长，也有可能是短，第三种可能才是你的目的条带。并不能保证你扩增出来的就是你的目的产物。