elisa都有什么类型,分别适用与检测哪些物质

2024-12-03 18:38:26
推荐回答(1个)
回答1:

 夹心法

夹心法常用于检测大分子抗原,一般之操作步骤为:

将具有专一性之抗体固著(coating)于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗体

加入待测检体,检体中若含有待测之抗原,则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结

洗去多余待测检体,加入另一种对抗原专一之一次抗体,与待测抗原进行键结

洗去多余未键结一次抗体,加入带有酵素之二次抗体,与一次抗体键结

洗去多余未键结二次抗体,加入酵素受质使酵素呈色,以肉眼或仪器读取呈色结果

  间接法

间接法常用于检测抗体,一般之操作步骤为:

将已知之抗原固著于塑胶孔盘上,完成后洗去多余之抗原。

加入待测检体,检体中若含有待测之一次抗体,则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结。

洗去多余待测检体,加入带有酵素之二次抗体,与待测之一次抗体键结。

洗去多余未键结二次抗体,加入酵素受质使酵素呈色,藉仪器(ELISA reader)测定塑胶盘中的吸光值(OD值),以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含量。

  竞争法

竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制,一般用于检测小分子抗原,其操作步骤为:

将具有专一性之抗体固著于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗体

加入待测检体,使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结

加入带有酵素之抗原,此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结,由于塑胶孔盘上固著的抗体数量有限,因此当检体中抗原的量越多,则带有酵素之抗原可键结的固著抗体就越少,亦即,两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗体键结,即所谓竞争法之由来。

洗去检体与带有酵素之抗原,加入酵素受质使酵素呈色,当检体中抗原量越多,代表塑胶孔盘内留下之带有酵素的抗原越少,显色也就越浅。

当需要侦测无法获得两种以上单一性抗体的抗原,或是不易得到足够的纯化抗体以固著于孔盘上时,一般会考虑使用竞争法ELISA。