积层胶电压这么大？我觉得1.积层胶浓度大了2.蛋白体积大。积层胶时间如此之长，对电泳结果会造成影响的，而且胶的硬度也会变化。建议你到小木虫或丁香园提问，丁香园不错的，推荐。
一般积层胶用的是5%120v30min的样子就随便什么蛋白可以跑出来了 都可以跑出来你看看你操作上有没有问题 丁香园上去提问是个不错的选择
