建议你还是选择CDS区不一样的地方设计引物吧，这样可以避免交叉污染引起的非特异扩增，扩增的序列长度不一定要一样，每个引物你最好设计两三对，然后做一个相对定量看看不同引物的扩增效率，选择比较好的两对引物做后续试验，内参基因的引物不需要跟目的基因的扩增产物一样长，这样你设计引物的时候很受限制，总体产物长度在80-150bp之间都是可以接受的，主要是做相对定量的时候不同引物之间的扩则效率要比较接近，这样才有可比性。
不需要和内参一样，产物也不需要都一样。关键是引物，引物GC含量不要太高，不要有引物二聚体，交叉二聚体，再就是目的片段不要太长，你可以设计好了先做普通PCR看看特异性以及引物二聚体，定量前做个溶解曲线看看，其实没什么，只要引物设计好了就没多大问题
内容全部来源于网络收集，如有侵权，请联系网站删除：QQ：24596024