这是我的pcr产物凝胶电泳图,哪位大神可以解答一下,为什么会出现前后拖带?怎样解决这个问题??

2024-12-16 15:01:04
推荐回答(4个)
回答1:

正常现象,没必要大惊小怪,你如果是用基因组作为模板的话,出现拖尾是很正常的现象,毕竟基因组序列那么大,出现一些与引物部分序列互补的序列区间也是可能的,如果是其他的DNA作为模板,则有可能是你的模板不纯造成的,另外体系中有些物质,比如SDS也可能显示一些假带,造成判带困扰,所以你可以无视这种现象,只关心你的目的条带是否扩增出来即可

回答2:

还有可能是你用的体系特异性不是很强,如果用普通的Taq酶扩增,尤其是基因组,这种情况比较常见的。如果你想特异性很好用做检测的结果,那么最好优化反应条件或者换用热启动酶,减少非特异性结合,这样拖尾就会少了。

回答3:

首先你要告诉我你的目的片段有什么特点,比如是否是高GC或者是低GC,这样就更好分析了,就目前的线索来看,你可以试着提高你的退火温度并缩短退火时间至15秒,将延伸时间缩短至30秒,也可以将延伸温度由72℃提高至75℃。或者,根本原因出现在引物上,如果你以前用同样的方法同样的酶同样的引物做都没有拖尾现象,而模板也没有出现问题的话,那么就可以考虑是引物部分降解。

回答4:

看你的marker都跑的很虚,该调调你的凝胶成像仪了,聚焦不准。
主带是很清晰的,没什么大问题,不影响切胶回收。
非要控制拖尾的话,建议适当提高退火温度,减少引物使用量。