关于基因工程试验中设计引物的问题。

2025-01-31 15:04:40
推荐回答(4个)
回答1:

CDS全称coding sequence,指编码序列,天然的翻译过程中,只翻译CDS,也就是说绝大多数蛋白的CDS都是以AUG(起始密码子,设计引物时用ATG)开头的以UAG,UAA,UGA(终止密码子,设计引物时用TAG,TAA,TGA)结尾的,你设计引物的目的是为了最终表达这个蛋白酶么?如果是,那根据CDS设计引物就可以了,我可以给你打包票没问题。CDS上游和下游的序列在基因工程表达中没有用的。你看下公司设计的引物是不是从CDS的两头设计的,如果上游引物和CDS的前22个碱基能对上就说明上游引物没问题。
还有一点你要注意,如果你将来要表达所用的表达载体是HIS*6标签用以纯化的,你的看看下游引物扩增的目的片段是否存在终止序列,如果存在,那么将来表达的时候HIS*6标签无法和你的目的基因融合表达,也就是说你表达的蛋白不能用镍层析柱进行纯化。

回答2:

如果两条引物都在基因的中间位置,那只有一种可能就是他们设计的是测序引物,并非PCR扩增引物。
你需要说明你的实验目的,先扩增然后测序验证?还是直接测目的基因的某个EXON、SNP之类的。。。

回答3:

我觉得要看你实验目的,我现在如果你想是得到1240bp的目标基因,直接用引物设计软件设计就行了。从你的描述上来看,可能是生工不太明白你的目的。先把你的问题明确的告诉我,这样好回答。

回答4:

你的序列里是不是有外显子和内含子存在呀?他们是设计的CDS区吗?
首先,你要确定你的序列是从哪里扩增,如果是cDNA的话,那么只要设计这个基因的全长1240bp就可以了,但是如果是在基因组中扩增的话,那么你要把内含子给去除掉。可能引物设计就要多个了。