琼脂糖凝胶电泳跑成这样是怎么回事

2024-12-18 11:31:30
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回答1:

电泳出现拖尾现象,就是弥散.其原因,主要从以下两个方面考虑:
1、PCR产物自身原因:
往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物 过多.
对策:①减少Taq酶的量,或调换另一来源的酶.②减少dNTP的浓度.③适当降低Mg2+浓度.④增加模板量,减少引物的用量 ,减少循环次数,提高退火温度.
2、电泳体系的问题:
(1)电泳缓冲液TAE或者TBE的污染,建议更换缓冲液.(2)上样时样品漂了,建议增加上样缓冲液的用量,以及小心加样.(3)电压太高.(4)适当把你的胶的浓度加大.(根据你的片断大小而定)(5)观察你的marker是否也存在拖尾现象,作为对照.

回答2:

根据我多年的经验,少年,你的胶背景亮说明你的UV开得太亮了,正常时候不需要这么强光就能看到条带。
从你胶的样子可以看出,你跑胶的时间太长了,看样子你用的是SYBR
green,这种染料在你电泳的时候是会向条带相反方向移动的,跑时间太长,造成你的胶这样下面一部分已经看不到marker和背景亮光了。而过长时间跑胶造成的温度升高(拿在手里热乎乎的软软的,听起来像便便。。。),使胶中的样品和染料很多都扩散出去了,造成你的maker和条带整个的不够亮。
从你marker的位置可可以看出你跑胶的时间很长,因为最大的条带的位置比较低了。
即使你的背景这么强,也可以看出在你样品孔的下方很近的地方有条带,我不知道你样品的大小和来源,但是可以给出以下几个可能原因:
你的loading
buffer不正确,造成样品条带异常移动
最可能原因是你的样品中DNA就那么大。如果你是提取质粒的话,你做错某步,把细菌的核DNA提取出来了,所以才那么大。你做错的可能是裂解那步,裂解时间超过5分钟了或者你剧烈混合裂解液和细菌了,只有invert就可以了。
你上样量也要保证,测一下浓度,一般200ng的条带就非常亮了。
跑胶时候,电压一般80-120,可以低,也可以高到200,但是室温下推荐80-100。时长20-60分钟为宜,一般推荐30分钟,不过你可以跑一段时间拿出来UV照一下,这时候你可以看到条带,如果分得不够开,再放回去跑一会就好了。如果实在需要长时间跑,放4度跑。