油镜在使用时必须在载玻片与物镜之间滴加镜头油，而普通显微镜不需要。油镜使用过程中要注意两点：
使用后镜头的清洁：镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度，用完油镜必须进行“三擦”（观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少量乙醇乙醚溶液擦去残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的乙醇乙醚溶液，后将镜体全部复原）。
观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。
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