置试管斜面种,冰箱恒温保存备用。
摇瓶种的制作:
(1)培养基的配制:
按液体培养基的配料办法按一定的配比制作培养基(土豆170克 麸皮30克,葡萄糖20克、磷酸二氢钾3克、硫酸镁1.5克 )
(2)装瓶
500毫升的三角瓶装料150毫升
(3)盖棉塞、绑牛皮纸
棉塞外包一层纱布,大小要合适,上面加盖一层牛皮纸,用线绳绑好。
(4)灭菌
0.12-0.13Pma)的条件下灭菌30分钟。
(5)接种
培养基温度降至30度以下时,将经过提纯活化处理的母种在无菌条件下用接种钩接入三角瓶,每瓶接入2-3块1cm的菌块,使菌块尽量漂浮在液面上。
(6)培养
把接好种的摇瓶置摇床(或静置24小时后)在20―25度的条件下振荡培养,一般4-5天即可长好。会见瓶里有大量基本均匀、活力旺盛的菌球。
培养终点及质量好坏的判断
①菌球形态:菌种长好后会看到菌瓶内充满大小均匀,活力旺盛,毛刺明显的大量菌球,静置5分钟后菌球占菌液浓度的50%以上或不分层,若菌球很少或大小不一值可能是质量有问题。
② 菌液澄清度:菌液中除菌球以外,无其它固形物,菌液由前期的微浑浊变的澄清透明,多数是浅黄色或橙黄色,如变的浑浊不清则很可能是染菌
③ 菌液气味:到培养后期菌液的糖香味会逐渐消失,取而代之的是或有或无的菌种特有的清香味,若有臭味、酸味、霉味则可能是染菌。