一、原理
醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维素薄膜作为支持物的电泳方法。带电颗粒在电场力作用下,向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳。由于各种蛋白质都有特定的等电点,如将蛋白质置于pH值低于其等电点的溶液中,则蛋白质将带正电荷而向负极移动。反之,则向正极移动。因为蛋白质分子在电场中移动的速度与其带电量、分子的形状及大小有关,所以,可用电泳法将不同的蛋白质分离开来。血清中含有多种蛋白质,它们的等电点都在pH 7.5以下。将血清放于pH 8.6的缓冲液电泳时,所有的血清蛋白都带有负电荷,在电场中将向正极移动。由于各种血清蛋白在相同pH时所带电荷数量不等,分子颗粒大小不一,因而泳动速度不同,经电泳被分离开来。血清蛋白质的等电点和分子量。
从前端至点样处的方向分别为清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白及γ-球蛋白。
本实验以醋酸纤维素薄膜(简称CAM)为支持物分离血清中的不同蛋白质。它是一种良好的呈均一泡沫状疏松薄膜,厚约120μm具有一定的吸水性。
电泳技术的原理:电泳是指在外加电场的作用下,带电的物质向其所带电荷相反的电极方向移动的现象。各种物质由于所带净电荷的种类和数目不同,因而在电场中的迁移方向和速度不同,从而可以对物质进行分离、分析和鉴定。
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白的原理: 以醋酸纤维薄膜为支持物,浸入ph8.6的缓冲液后吸去多余液体。将微量血清点于膜上,经电泳后,将薄膜置染色液中使蛋白质固定并染色,洗去多于染料。将膜条烘干,再将其用透明液进行透明处理。用光密度计或凝胶成像系统进行成分分析比较。
电泳后从负极到正极依次可得5条宽窄不同,颜色深浅不一的条带,依次为:γ球蛋白,β球蛋白, α2球蛋白,α1球蛋白,清蛋白.
醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维素薄膜作为支持物的电泳方法。带电颗粒在电场力作用下,向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳。
蛋白质所带电荷不同……四种 a b 前b r (希腊字母)