RNA琼脂糖凝胶电泳时为什么点样孔很亮,而且没有规律,时有时无,每次都是新胶及新的缓冲液?请各位帮忙

Marker很正常,目前还没有出现这种情况
2024-12-02 22:14:08
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回答1:

这是因为你RNA中含有蛋白或者多糖的污染,这些大分子物质影响了RNA的出孔,使很多RNA停留在孔中或者出孔很慢。这样你染色后就看到孔以及接近孔的位置很量。你最好上样前用分光光度计测下RNA的纯度,A260/280和A260/230,这两个值应该都在2.0左右才是纯度高的RNA。第一个值过低是蛋白污染,第二个值过低是多糖污染。

回答2:

不知道你的RNA样品纯不纯,是否含有DNA,蛋白质和多糖较多;还有就是点样的时候枪头不要戳进胶内。
我曾这样做过,没问题(仅供参考):①电泳RNA 所用器械如制胶的模具、梳子、电泳槽等用肥皂粉洗干净后用双蒸水冲洗二遍后在室温晾干备用。②用新的1XTBE 配制1. 2 %琼脂糖凝胶,倒胶时溴化乙锭(E直接加入凝胶中。③制备好的琼脂糖凝胶板放入电泳槽后再加入经高压灭菌过的1XTBE ,液面只能刚好同胶面平齐,缓冲液不要淹过胶面。④点样时,样品RNA 每10μl 加入2μl 上样缓冲液,上样缓冲液是用DEPC 处理的水配制的50 %甘油,另外单独点一样品孔含有3μl 溴酚蓝的上样缓冲液作为电泳指示剂,电泳电压4 V/ cm ,电泳时间2 h 左右便可取出凝胶在紫外灯下观看所提取的RNA 的质量或进行拍照记录。