培养基放入保温箱时，为什么要倒置

厌氧菌的分离鉴定
厌氧菌广泛存在于外界环境和人体的口腔、肠道和女性生殖道等部位，常引起内源性感染。据文献报道，约60 % 的临床感染有厌氧菌参与，且大多数是与需氧菌混合感染，故开展厌氧菌的检验对感染的诊断、治疗都有重要意义。
一、厌氧菌样品的采集Collection of anaerobic bacteria' s specimens
标本避免正常菌群污染和氧接触，采用下列方法：
(1) 脓胸及未破溃的脓肿：皮肤消毒后， 以无菌注射器抽取(排尽空针及针头内的气体) ，将针头插入无菌橡皮塞内送检。
(2) 肺分泌物和痰标本：用支气刷采取或环甲膜穿刺术。
(3) 尿液标本：用元菌注射器从耻骨上缘行膀脱穿刺术抽取。
(4) 血液标本：可用两端接有无菌针头的塑料袋或橡皮导管，将一端针头刺入静脉，待血液流出后将另一端针头立即插入培养瓶内(瓶内负压) ，使血液直接流入培养瓶内。
(5) 窦道、深部脓肿等的标本:可用特别采样器采取。
二、涂片与染色Smear preparation and stain
标本涂片、革兰染色、镜检，观察细菌的形态和染色性，并估计标本中大致的含菌量，可用"少量” " + "、" ++ "、" + ++"、" ++++ "表示。镜检不仅能反映各种厌氧菌的特殊形态，同时也能为鉴定厌氧菌提供参考和依据。如脆弱拟杆菌菌体细长，两端尖：韦荣球菌是极小的革兰阴性球菌。厌氧菌芽胞的位置、形态、大小对鉴定很有意义，必要时作芽胞形成试验。例如，芽胞在菌体极端且大于菌体呈鼓槌状，是破伤风梭菌的特征。根据厌氧菌的特殊形态，可初步确定有无厌氧菌感染，及时向临床医师发出一级报告，建议采用哪类药物。
三、标本接种Inoculating
一般标本接种3 个血琼脂平板，分别放置于有氧、无氧和含5 %~ l0 % CO2 的环境中培养。如果只要求检出厌氧菌，只需接种l 个厌氧血琼脂平板，也可增加1 个相应的选择厌氧血琼脂平板。为便于在混合培养中及早发现厌氧菌，一般将标本分3 段划线接种，在第1 和第2 段交界处贴1 张甲硝哗(5 mg/片)纸片，若出现隐约抑菌圈，则提示有厌氧菌生长。
不同厌氧菌的生长速度和菌落形态各异，色素也有不同，荧光产生与否也有助于鉴定，根据上述特征，可初步推测厌氧菌的种类：
1.革兰阴性杆菌
(1)在BBE 琼脂平板上有灰黑色、直径> lmm 的菌落，菌落周围有黑色的晕，可初步鉴定为脆弱拟杆菌。
(2) 在卡那万古溶血琼脂平板上，有棕色或黑色菌落，或用伍德灯照射有砖红色荧光者，为产黑素普雷沃菌。
(3)菌落沉入琼脂内，使培养基表面留有小坑者，可能是解脲拟杆菌和纤细拟杆菌。
(4) 菌落表面有小斑点，或如面包屑，结合涂片所见，可初步鉴定为具核梭杆菌。
2. 革兰阴性球菌 菌体很小，排列成双、短链或小堆，菌落小，不透明，可能是小韦荣球菌。
3. 革兰阳性球菌排列成长短不等的链，可能是消化链球菌。
4. 苹兰阳性无芽胞杆菌
(1)菌落呈臼齿形、粗糙，结核脓样分泌物中有硫黄样颗粒，可能是放线菌。
(2) 菌体呈X 、Y 、V 排列，菌落小，灰白，不透明，可能是丙酸杆菌。
5 .革兰阳性芽胞杆菌 只要见有芽胞，即可鉴定为梭菌属。菌落有双环溶血，卵黄平皿上卵磷脂酶试验和Nagler 试验阳性，涂片染色为革兰阳性短粗杆菌，有芽胞，有荚膜，可鉴定为产气荚膜梭菌。
四、耐氧试验Oxygen tolerance test
当厌氧平板上有细菌生长时，为了确定是否为厌氧菌，必须做耐氧试验。从每个琼脂平板上挑取4~5 个性状不同的菌落，每个菌落分别转种于2 块需氧血琼脂平板和1 块厌氧血琼脂平板(每个琼脂平板可划4~6 区，每区种一个可疑菌落) ，然后将平板分别放置在需氧、二氧化碳和厌氧环境中培养。
凡在厌氧环境生长，而在需氧和二氧化碳环境中不生长的细菌为专性厌氧菌(图3 - 48 中A 区) ;在需氧和厌氧环境中均能生长者为兼性厌氧菌(图3 - 48 中B 区) ;在需氧和二氧化碳环境中生长，而在厌氧环境中不生长者为专性需氧菌(图3 - 48 中C 区) ;在需氧、厌氧环境中均不生长或生长不佳，而在二氧化碳环境中生长良好的细菌为需二氧化碳菌(图3 - 48 中D 区) 。
五、鉴定试验Identification test
可依据厌氧菌的菌体染色形态、菌落特性以及对某些抗生素的敏感性作出初步鉴定。最后鉴定则要进行生化反应及终末代谢产物等检查。
生化试验主要包括多种糖类发酵试验、吲哚试验、硝酸盐还原试验、触酶试验、卵磷脂酶试验、脂酶试验、明胶液化试验及胆汁肉汤生长试验和硫化氢试验等。目前用于厌氧菌快速鉴定有胞外酶试验， 4 h 即可观察结果;自动微生物鉴定系统，如VITEK-ANI 、MicroScan- ANI 等也可鉴定厌氧细菌。
在进行厌氧菌分离鉴定的过程中，需注意下列事项: ①厌氧菌标本在采集和运输的过程中必须与空气隔绝(厌氧菌暴露于空气中时间太长可死亡) ，务必在30 min 内完成，同时应避免正常菌群的污染。②培养基要新鲜配制，若储存太久，有氧气溶解在表面或有过氧化物在培养基中，不利于厌氧菌生长。③ 若菌落太小，需用放大镜观察菌落。④作耐氧试验，要求从每个琼脂平板上挑取4 ~ 5 个性状不同的菌落，分别接种需氧和厌氧血琼脂平板，置于需氧、二氧化碳和厌氧环境中培养。⑤ 如作胞外酶鉴定， 一定要有足够的菌液浓度。

平板培养细菌的话是为了防止蒸发出来的水蒸气冷凝滴会培养基表面，防止污染。