首先需要一个表达载体，看你需要原核还是真核，看情况选择，然后有获得你需要的目的基因，在两端加酶切位点，将目的基因与载体连接到一起后就完成了质粒载体的构建了。
你的质粒载如果是克隆型的，那么必须有：复制起始和终止位点、多克隆位点、标记位点、分子量小、易分离等特点。如果是表达型的则必须有：转录起始位点，也就是要有启动子和终止子等。
PCR 酶切 连接 转化 涂板 摇菌 提质粒。。。。
