我做出来的PCR产物跑胶能出现清晰地条带,为什么测序公司不能测序,说是信号中断,什么原因?

2024-12-12 15:33:47
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回答1:

原因在于测序时经历了PCR反应及测序反应(测序反应本身也是PCR反应)二次聚合酶的打滑现象。 原因不明的复杂结构,测序结果就出现突然信号减弱或消失。出现这些现象的原因由DNA模板本身立体结构所造成的。
当DNA碱基中含GC含量高的时候,从某一位置开始聚合酶的聚合反应便无法进行下去。这样的情况,建议可以尝试换用反向引物进行测序。或者是将PCR产物做一个TA克隆后再测序,可以根本上解决测序信号中断的问题。

回答2:

多大的片段啊,可能是片段太大,可以多设计几条引物!

回答3:

多大的条带 拿通用引物去测一下 可能是里面有loop结构