为什么送去测序的片段要通过菌液，而不是直接拿PCR去测序？

2025-02-02 18:05:24

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回答1：

1）PCR产物可能有多条带（错配产生，但大小一样），将其导入大肠杆菌后，产生的单克隆一般只接受一个目的条带，通过重复，就可以在一定程度上排除错配造成的误差。且大肠杆菌复制的错配率远远低于PCR过程中的错配。
2）测序反应一开始时不稳定，讲目的条带导入载体中，由于载体的序列保守且已知，一开始的测序反应从载体的序列开始测可以保证目的条带测序的相对准确性。

回答2：

由于测序的仪器敏感度等原因，每家测序的要求不一样，收费也不一样。
一般来说，测序的样本可以是PCR产物，也可以是质粒。楼上说的有一定道理，但不是不能用PCR产物测序的理由。

要求你提供菌液，是因为他们的测序反应体系对质粒的溶液比较敏感，比如对EDTA，盐溶液的浓度等，所以干脆他们自己来提质粒。PCR产物也类似。他们不清楚你是如何做PCR的，也就不知道反应物当中有没有会抑制测序的成分。