首先要配制含有营养物质的培养基，可以用牛肉汁加琼脂熬制；然后把培养基和所有用具进行高温灭菌，以防杂菌对实验的干扰；为防止高温杀死细菌、真菌，要等冷却后，在进行接种，接种后放在温暖的地方进行；恒温培养．注意：定期观察并详细记录实验现象．故正确的操作顺序是：①配制含有营养物质的培养基；③高压灭菌；②接种；④恒温箱中培养．故选D．
