用质粒做载体将目的基因导入受体细胞后怎么办?

2024-12-30 21:22:28
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回答1:

分情况讨论,如果质粒拷贝数不高(如严谨性复制),且外源蛋白表达水平不高,不会对宿主产生严重影响,但也容易随着细胞分裂而出现“质粒丢失”。如果质粒高拷贝或者质粒装有强启动子,胞内外源蛋白的含量会很高(甚至70%),一个是外源蛋白形成包涵体,或者启动胞内蛋白质降解系统,如蛋白酶体、热休克蛋白,加速异源蛋白的降解,此时细胞内组成型蛋白(俗称持家蛋白,即生长必须蛋白)的含量显著下降,更新速率降低,表观上就是细胞生长和分裂受限制。
如果质粒上携带有与宿主细胞基因组同源的序列,易发生重组,改变宿主细胞基因组(注意是基因组),当然也有可能使宿主某个(些)基因插入失活,比如我们将质粒插入到组氨酸合成基因中,使重组宿主成为组氨酸突变体,以供阳性筛选。这是基因工程中常见的筛选策略。
完毕,祝好