PCR-DGGE实验原理和优点是什么？

博凌科为-为你解答：变性梯度凝胶电泳（DGGE）是一种根据DNA片段的熔解性质而使之分离的凝胶系统。核酸的双螺旋结构在一定条件下可以解链，称之为变性。核酸50%发生 变性时的温度称为熔解温度（Tm）。Tm值主要取决于DNA分子中GC含量的多少。DGGE将凝胶设置在双重变性条件下：温度 50~60 ℃，变性剂0~100%。当一双链DNA片段通过一变性剂浓度呈梯度增加的凝胶时，此片段迁移至某一点变性剂浓度恰好相当于此段DNA的低熔点区的Tm 值，此区便开始熔解，而高熔点区仍为双链。这种局部解链的DNA分子迁移率发生改变，达到分离的效果。Tm的改变依赖于DNA序列，即使一个碱基的替代就 可引起Tm值的升高和降低。因此，DGGE可以检测DNA分子中的任何一种单碱基的替代、移码突变以及少于10个碱基的缺失突变。为了提高 DGGE的突变检出率，可以人为地加入一个高熔点区GC夹。GC夹（GC clamp）就是在一侧引物的5端加上一个30~40bp的GC结构，这样在PCR产物的一侧可产生一个高熔点区，使相应的感兴趣的序列处于低熔点区而 便于分析。因此，DGGE的突变检出率可提高到接近于100%。作为一种突变检测技术，DGGE具有如下的优点：（1）突变检出率高。DGGE的突变检出率为99%以上。（2）检测片段长度可达1kb，尤其适用于 100~500bp的片段。（3）非同位素性。DGGE不需同位素掺入，可避免同位素污染及对人体造成的伤害。（4）操作简便、快速。DGGE一般在24小时内即可获得结果。（5）重复性 好。但是，该方法需要特殊的仪器，而且合成带GC夹的引物也比较昂贵。

在碱基序列存在差异的DNA双链解链时需要不同的变性剂浓度，他们一旦解链，在聚丙烯酰胺凝胶中电泳的行为就会发生改变，所以序列不同的DNA片段就会在电泳中的位置不同，不同泳道中同一位置就是序列相同的DNA片段。