230问答网 > T 载体与目的基因连接成功，测序结果也正确。从新摇菌，提取质粒，在进行双酶切，一直切不下来。

T 载体与目的基因连接成功，测序结果也正确。从新摇菌，提取质粒，在进行双酶切，一直切不下来。

用的是 ClaⅠ ，EcoR Ⅰ 两种酶体系20酶切 3小时过夜都试过了期待解决

2024-12-14 06:36:38

推荐回答（3个）

回答1：

解决办法：1、cla1是一个比较不常见的酶，可能酶切体系和ECOR1的缓冲体系不一样，试着分别酶切，就是先切cla1，然后纯化后切ECOR1；或者查找哪个酶的酶切效率高些，那个后切；2、3个小时可能太短了，我一般都是5个小时，或者过夜；3、可能是你菌挑错了，或污染了，重新调菌或者把原来构建成功的质粒进行转化，再酶切。希望对你有帮助。

回答2：

可能是你酶的问题哦，加入酶失活了，切一个星期都没用，建议换另外实验室的试一下。

回答3：

你的引物含有ClaⅠ的酶切位点吗？用载体上的其他酶切位点，双酶切鉴定下看看。也许酶有问题

T 载体与 目的基因连接成功，测序结果也正确。从新摇菌，提取质粒，在进行双酶切，一直切不下来。

T 载体与目的基因连接成功，测序结果也正确。从新摇菌，提取质粒，在进行双酶切，一直切不下来。