如何选择合适的全血DNA提取方法

2025-03-05 23:00:05

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回答1：

从全血中提取DNA和RNA应该说是最基本的工作了，提取的DNA和RNA质量的好坏直接影响了下游的实验和分析，可供选择的方法非常多，乱花渐欲迷人眼，如何选择最适合的方法，成了很多人实验开始前最难以抉择的事情。我们从两个方面，层层剥茧，分析最佳的实验方法。
1、全血的采集保存和dna的提取
I. 用含抗凝剂的采血管进行采血，抗凝剂一般有EDTA和肝素，EDTA更好一些，不会影响下游的反应，如果没有采血管，也可以自己添加抗凝剂EDTA，提前准备0.04M的edta溶液，每5ml的血液中加入0.4ml配好的EDTA溶液，颠倒混匀即可。保存于-20℃至-80℃，一般2-3年内均可以提取，保存时间越短，提取的质量越高，最好在2个月内提取。
II. DNA提取方法的选择：全血提取试剂盒一般有离心柱和溶液型两种(比如Qiagen、 Promega、Bioteke;摒弃酚氯仿手提的方法，时间长毒性大)，原理及步骤基本相同。虽然各公司推出了N多型号，让人不知如何去选择，但从原理和操作步骤看，基本就是离心柱和溶液型两种。一般来说，离心柱(DP1801)的提取纯度高一些，但是处理量小(0.1-1ml)、得率略低;溶液型 (DP2101或DP2201)的提取量大(1-10ml)得率也高于离心柱。医院的血液标本一般在2ml以上，一般选择溶液型的方法提取.在说到国产和进口差别的时候，很多人以为进口一定比国产的好，我们觉得没有最好，只有更好!在不断的进行试验优化之后，全血基因组dna提取试剂盒DP2101或 DP2201开创了第三代技术，不需要蛋白酶K消化，进口的都是要借助蛋白酶K的啊!DP2101或DP2201减少了蛋白酶K现配现用的麻烦和消化的时间，而且提取量和稳定性更好。
III. 非抗凝血(凝固血)能否提取?答案是肯定的，而且一点都不麻烦，提取效果和抗凝血没有差别!在你找遍了进口的所有品牌都找不到后，回过头来您才发现原来他就在身边，百泰克的凝固血基因组dna提取试剂盒已经有很多忠实的用户。
2、全血RNA如何提取
I. 全血RNA提取过程哪些是RNA降解的因素?
全血中RNA酶是非常丰富的，RNA在没有保护的状态下很容易降解!哪些是状态RNA不受保护呢，比如红细胞裂解液裂解红细胞的过程，红细胞裂解液是低浓度的平衡盐溶液，没有抑制RNase的成份，这时候RNA 不受保护;DNA酶消化的时候RNA也不受保护，这个时候也没有抑制RNase的成份。
II. 什么样的提取方法更好?
我们在选择方法的时候要倾向于对RNA全程有保护的方法!一般的方法都是先用红细胞裂解液裂解红细胞，然后从白细胞提取核酸，还要经过DNA酶的消化去除DNA，这种并不是最好的方法，过程中有很多RNA降解的因素。所以直接裂解法是最好的方法，将采集的血液迅速加入3倍体积的裂解液RLS——血液(液体样本)总RNA快速提取试剂盒(离心柱型)的裂解液，迅速颠倒混匀。裂解液RLS含有强烈的蛋白变性剂，能迅速变性蛋白，是RNase变性，不能对RNA降解。裂解后的混合液还可以用来运输，以避免RNA降解，这个方法成为博奥生物制作表达谱芯片RNA运输和提取的推荐方法
农药、除草剂、各种污染物、人工合成物等异生物质，对环境和土壤微生物的多样性、种群变化产生明显影响;转基因作物是否发生土壤基因转移的检测，转基因作物的安全性评价等
方面的研究，都需要准确的提取高质量的DNA进行检测!
土壤中可培养的微生物可能不及所有微生物总数的0.3%，常规提取DNA的方法很难提取到DNA，很难把土壤中的腐殖酸去除干净，而微量的腐殖酸就可能导致PCR失败。
目前国际上商用的试剂盒虽然能提取到土壤中微生物的DNA，但由于破碎方法采用玻璃珠或者钢珠破碎，导致基因组断裂严重，影响DNA质量;第二，由于必须购买破碎专用的破碎机或振荡器，增加其使用成本;第三，其试剂盒为了保证DNA纯度，采用了包括玻璃奶、离心吸附柱串联的纯化方式，导致了DNA大量的损失，得率很低，很难真正反映出土壤中微生物的多样性。
百克推出的土壤基因组DNA快速提取试剂盒(DP4001)采用创新技术，摒弃了机械破碎细胞的方法，采用酶法破碎，保证了基因组的完整性，摒弃了玻璃奶、离心吸附柱串联纯化DNA的方式，极大的提高了DNA的得率，几乎土壤中所有的微生物DNA都能提取出来，能真正反映土壤中微生物的多样性!

回答2：

最简便快捷的方法就是用试剂盒，QIAGEN，BIOG，TIANGEN，等等，都有相对应的产品

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