在利用大肠杆菌合成蛋白质时,有些情况下要添加IPTG,为什么

2024-12-15 13:51:16
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回答1:

如果表达载体采用了乳糖操纵子来调控表达,就需要用IPTG诱导。

乳糖操纵子的结构你应该知道。简单地说,在没有乳糖存在时,lac操纵子(元)处于阻遏状态,Lac阻遏蛋白与O序列结合,阻碍RNA聚合酶与P序列结合,抑制转录启动。当有乳糖存在时,阻遏蛋白变构,解离,抑制解除,lac操纵子即可转录表达。

如果用乳糖诱导,乳糖会不断被代谢消耗掉,就需要不断添加。异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一种乳糖类似物,诱导作用很强,而且不被细菌代谢,十分稳定,加一次就行,因此被实验室广泛应用。

表达载体构建成诱导型,有利于表达调控。表达蛋白并不总是需要最大程度表达,很多时候表达过多会生成包涵体,里面的蛋白是变性的,还需要再进行复性,不但麻烦,而且有些蛋白很难复性。所以一般如果发现生成包涵体,就会降低表达量,让它别产生包涵体。这时就要试验用不同浓度的IPTG诱导,因为不同的蛋白,不同的表达条件,采用的诱导浓度都不一样。