氨基酸的分离鉴定--纸层析法 有什么注意事项

样品中可能含有这3种氨基酸氨基酸是指样品主要是这三种氨基酸还是微量杂质是这三种氨基酸，这是不一样的。

如果样品就是这三种氨基酸的一种或几种组成，那直接氘水溶了打个核磁就好了，比例也有了。

如果是复杂样品含有这三种氨基酸，那基本只能用hplc了，接不接ms看样品，hplc分离这些还是很简单的，典型的就酸性磷酸盐缓冲液/乙腈，柱子可以选比如Waters的BEH-Amide柱或者CORTECS HILIC柱走HILIC条件，这3种氨基酸除了天冬氨酸外都是偏中性烷基侧链的，用Waters的CSH C18柱或者CORTECS C18+柱这类表面带电颗粒的柱子走反相应该也是可以的。
先说加入15%三氯醋酸的必要性：作为一种蛋白质沉淀剂，它能将混有的蛋白质沉淀而除去，避免进行纸层析时混有的蛋白质和茚三酮溶液反应干扰实验。
其次，题主先搞明白纸层析的原理。由于产物中的丙氨酸比谷氨酸极性弱，由相似相容原理，丙氨酸会更易溶于流动相即酚溶液（非极性）中得以分离。而加入的三氯醋酸会使得丙氨酸带上正电荷，和谷氨酸极性的差别变小，不易通过纸层析分离。

.点样时要避免手指或唾液等污染滤纸有效面（即展层时样品可能达到的部分）.
2 .点样斑点不能太大（直径应小于 0 .3 cm ）,防止层析后氨基酸斑点过度扩散
和重叠,且吹风温度不宜过高,否则斑点变黄.
3.展层开始时切勿使样品点浸入溶剂中.