pcr扩出目的片段及引物二聚体,哪出了问题

2024-12-30 23:13:37
推荐回答(2个)
回答1:

只要目的片段位置正确 无需去管引物及其二聚体的,结果可靠。
究竟是不是引物二聚体 你从理论上就可以分析判断。

一般常见情况是引物加过量了,在溴酚蓝位置常见亮带,在这中情况下,你不需要理他,若需要漂亮图片(发论文),2办法:可以减少引物加入量,同时稍微降低镁离子浓度;或者在保证底物不缺乏情况下,增加几个循环 就可以消除引物带。

回答2:

要看你的PCR目的是什么了,如果是相对定量的话,结果不太可靠,因为引物二聚体影响目的基因的扩增了,因此可比性降低;如果只是用于定性判断(阴性或阳性)、测序或者克隆则没有关系。

想减少二聚体的话,建议你提高退火温度,减少PCR反应中加入的引物量,原来的四分之一即可。