电泳DNA时,拖尾现象很严重,造成这种现象的原因有哪些?

2024-12-15 16:44:33
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回答1:

电泳出现拖尾现象,英文成为smear,就是弥散。其原因,主要从以下两个方面考虑:
1、PCR产物自身原因:

往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物 过多。

对策:①减少Taq酶的量,或调换另一来源的酶。②减少dNTP的浓度。③适当降低Mg2+浓度。④增加模板量,减少引物的用量 ,减少循环次数,提高退火温度。

2、电泳体系的问题:

(1)电泳缓冲液TAE或者TBE的污染,建议更换缓冲液。(2)上样时样品漂了,建议增加上样缓冲液的用量,以及小心加样。(3)电压太高。(4)适当把你的胶的浓度加大。(根据你的片断大小而定)(5)观察你的marker是否也存在拖尾现象,作为对照。

回答2:

1.电流过高(或电压过高);

2.胶做的不够均一(胶没做好);

3.样品本身是混合物或上样量超过上限。

回答3:

点样的时候,点样点太粗。
点样点越细越明显
不用怕量不够