菌种活化就是将保藏状态的菌种放入适宜的培养基中培养,逐级扩大培养是为了得到纯而壮的培养物,即获得活力旺盛的、接种数量足够的培养物。菌种发酵有一般需要2-3代的复壮过程,因为保存时的条件往往和培养时的条件不相同,所以要活化,让菌种逐渐适应培养环境
要明白菌种活化的情况就需要了解菌种保藏的方式和方法。目前国际国内常用的菌种保存方法包括:定期移植法、液体石蜡法、沙土管法、真空冷冻干燥法、80℃
冰箱冻结法、液氮超低温冻结法。
对于不同的保存方式活化的方式也不同:
1
定期移植法的菌种复苏较简单,直接转接即可;
2
液体石蜡法保存的菌种在复苏时,挑取少量菌体转接在适宜的新鲜培养基上,生长繁殖后,再重新转接一次;
3
沙土管法保存菌种在复苏时,在无菌条件下打开沙土管,取部分沙土粒于适宜的斜面培养基上,长出菌落后再转接一次。或取沙土粒于适宜的液体培养基中,增殖培养后再转接斜面;
4
真空冷冻干燥法保存菌种在复苏时先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部,将安瓿管顶部烧热,
用无菌棉签沾冷水,在顶部擦一圈,顶部出现裂纹,用挫刀或镊子颈部轻叩一下,敲下已开裂的安瓿管的顶端,用无菌水或培养液溶解菌块,使用无菌吸管移入新鲜培养基上,进行适温培养;
5
-80℃
冰箱冻结法保存菌种复苏时,从冰箱中取出安瓿管或塑料冻存管,应立即放置38℃-40℃水浴中快速复苏并适当快速摇动。直到内部结冰全部溶解为止,约需50秒-100秒。开启安瓿管或塑料冻存管,将内容物移至适宜的培养基上进行培养
6
液氮超低温冻结法保存菌种复苏与-80℃
冰箱冻结法保存菌种复苏相似,从液氮罐中取出安瓿管或塑料冻存管,应立即放置在38℃-40℃水浴中快速复苏并适当摇动。直到内部结冰全部溶解为止,一般约需50秒-100秒。开启安瓿管或塑料冻存管,将内容物移至适宜的培养基上进行培养。
总结一下菌种活化需要以下几个步骤:
第一配置菌种适宜生长的培养基
第二将菌种从保藏状态恢复到室温状态,比如将冷冻的菌种解冻
第三将通过操作将保藏的菌种接种到培养基中培养,此步骤称为菌种复壮
第四步挑选培养基茁壮的菌落,挑选其中部分菌落接种到新的培养基中培养,重复此步骤2-3次,从而得到生长良好的菌落
经过这四个步骤就到达将菌种从保藏状态活化的目的
希望对你有帮助!
楼上太绝对了。
除了平板你还可以用液体培养基活化,按照1%的接种量接种到新鲜液体培养基。
如果是甘油管的活化,建议还是液体活化。
保温温度和时间根据不同的菌种自己调整。
取保存的菌种,在无抗平板上划线,温育24h,挑取长出的单菌落进行扩大培养,即完成活化步骤。