如何确定测量时使用的波长（邻二氮菲分光光度法测定铁的含量）

　　邻菲罗啉分光光度法测铁使用的是510nm的波长。在不清楚分析波长的情况下，需要对样品进行光谱扫描，找最大吸收峰来确定分析使用的波长。
　　邻二氮菲分光光度法测定铁的含量
　　实验步骤：
　　1.吸收曲线的绘制 用吸量管准确吸取10-4 mo1·L-l铁标准溶液10 mL，置于50 mL容量瓶中，加人10%盐酸羟胺溶液1 mL，摇匀后加人1mol·L-l醋酸钠溶液5 mL和0.1％邻二氮菲溶液3 mL，以水稀释至刻度，摇匀。在分光光度计上，用l cm比色皿，以水为参比溶液，用不同的波长，从430～570 nm，每隔20 nm测定一次吸光度，在最大吸收波长处附近多测定几点。然后以波长为横坐标，吸光度为纵坐标绘制出吸收曲线，从吸收曲线上确定进行测定铁的适宜波长（即最大吸收波长）。
　　2.测定条件的选择
　　（1）邻二氮菲与铁的配合物的稳定性 用上面溶液继续进行测定，在最大吸收波长510 nm处，从加人显色剂后立即测定一次吸光度，经15min，30 min，45 min，60 min后，各测一次吸光度。以时间（t）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标，绘制A－t曲线，从曲线上判断配合物稳定的情况。
　　（2）显色剂浓度的影响 取25 mL容量瓶7个，用吸量管准确吸取10-4 mo1·L-1铁标准溶液5 mL于各容量瓶中，加人10％盐酸羟胺溶液1mL摇匀，再加入l mol·L-1醋酸钠5 mL，然后分别加入0.1％邻二氮菲溶液0.3，0.6，1.0，l.5，2.0，3.0和4.0 mL，以水稀释至刻度，摇匀。在分光光度计上，用适宜波长（510 nm），1 cm比色皿，以水为参比测定不同用量显色剂溶液的吸光度。然后以邻二氮菲试剂加人毫升数为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制A一V曲线，由曲线上确定显色剂最佳加人量。
　　（3）溶液酸度对配合物的影响 准确吸取10-4 mol·L-l铁标准溶液10 mL，置于100 mL容量瓶中，加人2 mol·L-1盐酸5 mL和10％盐酸羟胺溶液10 mL，摇匀经2 min后，再加人0.1％邻二氮菲溶液30 mL，以水稀释至刻度，摇匀后备用。
　　取25 mL容量瓶7个，用吸量管分别准确吸取上述溶液10 mL于各容量瓶中，然后在各个容量瓶中，依次用吸量管准确吸取加人0.4 mol·L-1氢氧化钠溶液l.0，2.0，3.0，4.0，6.0，8.0及10.0 mL，以水稀释至刻度，摇匀，使各溶液的pH从小于等于2开始逐步增加至l2以上，测定各溶液的pH值。先用pH为l～14的广泛试纸确定其粗略pH值，然后进一步用精密pH试纸确定其较准确的pH值（采用pH计测量溶液的pH值，误差较小）。同时在分光光度计上，用适当的波长（510 nm）l cm比色皿，以水为参比测定各溶液的吸光度。最后以pH值为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制A－pH曲线，由曲线上确定最适宜的pH范围。
　　（4）根据上面条件实验的结果，找出邻二氮菲分光光度法测定铁的测定条件并讨论之。
　　3．铁含量的测定
　　（1） 标准曲线的绘制 取25 mL容量瓶6个，分别准确吸取的10μg·mL-l铁标准溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0和5.0 mL于各容量瓶中，各加10％盐酸羟胺溶l mL，摇匀，经2 min后再各加1mol·L-l醋酸钠溶液5 mL和0.1％邻二氮菲溶液3 mL，以水稀释至刻度，摇匀。在分光光度计上用l cm比色皿，在最大吸收波长（510 nm）处以水为参比测定各溶液的吸光度，以含铁总量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
　　（2）吸取未知液5 mL，按上述标准曲线相同条件和步骤测定其吸光度。根据未知液吸光度，在标准曲线上查出未知液相对应铁的量，然后计算试样中微量铁的含量，以每升未知液中含铁多少克表示（g·L-1）。
　　数据记录与处理
　　1．记录分光光度计型号，比色皿厚度，绘制吸收曲线和标准曲线； 2．计算未知液中铁的含量，以每升未知液中含铁多少克表示（g·L-1）。

邻菲罗啉分光光度法测铁使用的是510nm的波长！在不清楚分析波长的情况下，需要对样品进行光谱扫描，找最大吸收峰来确定分析使用的波长！