既然要表达该基因的产物，自然要表达完整的基因。所以上下游引物就是在你序列的两端了。序列应该以CDS序列。我们是以RNA为模板反转录后扩增。记得加上酶切位点。
在序列的两端，至少要包括全部CDS序列，可以往外延伸来设计引物，不能往里缩短，通俗讲就是要扩增片段包含全部CDS序列。
