菌种保藏及活化的问题

一、安瓿瓶装微生物菌种开封1-1、用浸过70％酒精的脱脂棉擦净安瓿瓶。1-2、用火焰将安瓿瓶口加热灭菌。 1-3、用镊子将铝封口撕开。二、菌株恢复培养2-1、用无菌吸管，吸取0.3-0.4ml适宜的液体培养基，滴入安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。2-2、取约0.2ml菌体悬浮液，移植于指定的琼脂斜面培养基上，剩余的菌液，注入指定的液体培养基内（3-4ml），然后在建议的温度下培养。三、注意事项3-1、菌种活化前，请将安瓿瓶保存在5-10℃的环境下。3-2、厌氧菌的培养，如无特别说明，自开封至接种完成，均需以无氧气体充填，以保持厌氧状态。3-3、某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需连续两次继代培养才能正常生长。四、制作ｅｍ菌液4-1、菌种活化:用ｅｍ菌种10克、红糖0.1公斤（红糖先用热水溶化），加入1公斤的水。注：（先把水加热到100°c后加入红塘或白糖，而后继续加热5分钟。冷却到40°c时加入ｅｍ菌种），密闭发酵(35°c-40°c温度)下活化3天，打开容器口闻到有酸甜味即活化成功。可以作为液体菌种使用。4-2、制作原液：将活化好的液体菌种加入二级发酵罐。菌种——二级发酵罐(密闭) (加水比例:按1:10的比例加入) 二级发酵液:（10%的无菌糖水！ 0.1%琼脂粉！温度35-40度！发酵5-7天！）成品发酵液标准（气味：酸甜！ ph值：4.0-5.0！ 活菌含量：100亿/ml ！）

多低温？多长时间？4°C的话时间最多最多不要超过1周，零下保存的话记得加甘油，时间可以长一点。其实我建议是零下保存，然后用的时候重新划线挑菌再摇就好了。总之如果不马上用的话，无论怎么保存，再次用之前最好还是划个线，挑菌摇一晚再用比较好。

如果是基因工程菌,要考虑质粒丢失的可能性

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