重叠延伸PCR技术由于采用具有互补末端的引物,使PCR产物形成了重叠链,从而在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸,将不同来源的扩增片段重叠拼接起来。
重叠延伸PCR技术成功的关键是重叠互补引物的设计：
引物F及R为基因两端特异引物，其中Fm及Rm为中间引物。其中引物Fm及Rm中间共享一段序列。
分别用引物F和Rm及Fm和R进行配对进行PCR。注意该步一定不要用Taq酶，因为Taq酶容易在PCR产物末端加A，从而可能会使产物移码突变。
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