都可以。最排除背景的方法是用交叉引物做菌P，也就是上游引物是载体引物，下游引物是目的基因下游引物，或者上游引物是目的基因上游引物，下游引物是载体下游引物，这样可以最大限度排除背景，只要能扩出来的基本上就可以肯定是重组子了
都可以。只要使用你自己基因的引物就可以了，没有区别。一般载体有一个通用引物，没有必要合成。
一般是目的片段PCR 不排除特殊情况
