多克隆抗体相对于单克隆抗体来说,它能产生更多种类的抗体,这是它最突出的优点。缺点是抗体种类多,筛选的工作量就很大,即使运用了标记的方法,也会造成不易区分,工作繁重等。
优点还有便宜。定制也快。成功率也高。相对定制单抗而言。
多克隆抗体的优点是,可以识别同一抗原的多个表位,因此在免疫检测中,可以识别更多的抗原,也比较少收到抗原构象变化的影响。因此在相同条件下,利用多克隆抗体可以提高检测的灵敏度,对一些丰度偏低的蛋白更容易检出。
缺点也是因为可以识别多个抗原表位,先对来说是一组抗体的混合物,可能同时存在多种抗体的亚型。所以在特异性方面不如单克隆抗体。用多克隆抗体做免疫检测时,容易造成背景,例如在WB中有杂带,在IHC中背景染色较深等等。由于多克隆抗体的识别表位是未知的,在查询文献的时候,也不太容易确认哪些抗体是可用的,因为除非提供货号否则很难像单克隆抗体一样买到检测相同表位的抗体,还需要实验优化的工作。
.原理 免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。 直接法:将标记的特异性荧光抗体,直接加在抗原标本上,经一定的温度和时间的染色,用水洗去未参加反应的多余荧光抗体,室温下干燥后封片、镜检。 间接法:如检查未知抗原,先用已知未标记的特异抗体(第一抗体)与抗原标本进行反应,用水洗去未反应的抗体,再用标记的抗抗体(第二抗体)与抗原标本反应,使之形成抗原—抗体—抗体复合物,再用水洗去未反应的标记抗体,干燥、封片后镜检。如果检查未知抗体,则表明抗原标本是已知的,待检血清为第一抗体,其它步骤的抗原检查相同。 标记的抗抗体是抗球蛋白抗体,同于血清球蛋白有种的特异性,如免疫抗鸡血清球蛋白只对鸡的球蛋白发生反应,因此,制备标记抗体适用于鸡任何抗原的诊断。)荧光效率高,标记后下降不明显。 3)荧光色泽与背景色泽对比鲜明。 4)标记后能保持生物学活性和免疫活性 5)标记方