PCR的两步法和三步法有什么区别

2024-11-22 16:13:57

推荐回答（2个）

回答1：

很多情况我们都常用三步法，保证在72度延伸，但是如果条件很苛刻，我们用两步法能够得到三步法批不到的片段。您说的如果是定量PCR的话，多情况用二步法，因为可以再60度左右既可以退火又可以延伸，因此很多定量PCR仪推荐用两步法。但是如果你想得到更加严谨的数据，三步法用于定量PCR是更准确的。

回答2：

1、步骤不同：两步法退火和延伸同时在60℃-65℃间进行，以减少一次升降温过程，而三步法则分两次完成。
2、用时不同：两步法减少一次升降温过程，提高了反应速度，用时较短。而三步法则比两步法用时更长。
3、适用条件不同：两步法中，PCR扩增区很短，即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成。三步法的PCR扩增区则较长，需要降低系统温度，引物与DNA模板结合，形成局部双链。