根据某一基因mRNA序列设计的引物,可以用来从个体提取全基因组中DNA中扩增该基因么?

2025-01-25 03:37:50
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回答1:

根据mRNA(真核的)设计的引物,一般如果用DNA做模板的话,那么会出现的情况会是以下几种。一是能扩增出条带,但目标条带比你要的条带要大,因为你会连同内含子一同扩增出来,所以片段会偏大。二是什么都扩增不出来,这种情况一般是两种原因,1个是内含子片段太大,taq聚合酶没有延伸完,这种情况是很常见的,真核生物的基因组DNA编码序列中的内含子一般都很大。还有一种原因是你设计的引物正好是跨了内含子的序列,也就是说你的引物序列设计的时候位于两个外显子之间,这样的情况是扩增不出东西的。不过这种情况很少,因为一般设计的引物长度约20bp,而且位于序列的最两边,在最两边的这么少数碱基中出现内含子的可能性很小。最后一种情况是扩增出正好和你目标序列差不多的片段,原因是基因组DNA中有一些序列是没有内含子的,典型的就是线粒体和叶绿体DNA,这些DNA更接近于原核生物,编码的基因是没有内含子的。

回答2:

要用反转录PCR

“根据mRNA设计引物,然后用DNA模版中扩增”,瞎搞,没这么干的。

回答3:

DNA模板就是从RNA反转录来的