基因组做模板，最大的麻烦是特异性问题，特异性不好，杂带会比较多。有时引物设计的特异性比较好，常规pcr就基本搞定。
建议你的模板量不要太大，在设置pcr条件时，先做5个稍高的退火温度，以扩增出更多的特异性产物，再用低2-3度的退火温度做后面的循环。
如果杂带多，建议用梯度pcr仪，先做梯度退火温度，看什么条件下杂带少，就先用这个温度p上5-10个循环，再降温。
祝实验顺利，欢迎继续讨论！
重叠PCCR是什么概念？nested PCR？
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