PCR扩增1000bp左右的产物反应体系和温度一般怎样设定?

2024-11-26 13:53:23

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回答1：

反应体系要看你引物和模板的量、性状，一般反应总体积为25微升的话，引物各1微升，10×buffer 2.5微升即可，DNA聚合酶参照其说明书加量，一般0.3-0.5微升。
循环参数：94°变性30-45s足够，72°延伸也可设45s-1min，复性温度很关键，要看引物的特性（G+C%、是否容易形成发卡、二聚体等）和特异性（与模板DNA的同源性）等，一般在50°左右。
此外，要根据出带与否以及带的亮度、性状（sharp与否）不断调整退火温度和Mg的浓度。

回答2：

这个很要看样本了。