目的片段和载体连接 最少要多长时间,片段有100以下的还有900bp的,谢谢!

2024-12-28 01:34:12
推荐回答(2个)
回答1:

关键看你连接酶的酶活了
在20 μl的连接反应体系中,6 μg的λDNA-Hind III的分解物在16℃下反应30分钟时,有90%以上的DNA片段被连接所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。
连接完成可以储存,我一般就直接4度

回答2:

楼主后面解决了吗?我的实验和你差不多,用的试剂都是一样的,最后做菌落PCR的时候都是一条900bp的条带加几条较浅的非特异性扩增的条带。100bp以下应该是引物二聚体吧。但我是连的目的片段混合物,按理说应该每个菌落PCR电泳出来条带都会不一样。你是怎么解决的呀?