透析是利用半透膜的选择性在溶液里分离大分子和小分子的一种分离技术,常常用于除去蛋白或核酸样品中的盐、变性剂、还原剂之类的小分子杂质,有时也用于置换样品缓冲液。样品在膜的一边,缓冲液在另一边,小分子即向两边扩散直到平衡透析是利用半透膜的选择性在溶液里分离大分子和小分子的一种分离技术,常常用于除去蛋白或核酸样品中的盐、变性剂、还原剂之类的小分子杂质,有时也用于置换样品缓冲液。样品在膜的一边,缓冲液在另一边,小分子即向两边扩散直到平衡,而大分子则由于半透膜的阻拦而留在一端,通过不断更换缓冲液,即可将样品中要除掉的小分子稀释到足够低的浓度。该技术自五十年代发展流行起来,主要使用半透膜制成的透析袋作为工具,一直存在透析时间长、样品回收率不高、无法处理微量样品的难题。如今Pierce公司推出三种不同的透析工具有效解决了部分问题.
这是专为10到100微升的微量样品透析而设计的。把样品加在平底的透析管(类似小量提质粒的离心纯化柱Mini Spin,可以插入1.5毫升的离心管中,管底是半透膜)中,再插入特制的浮板(浮漂)中,置于缓冲液面10分钟即完成透析。实验表明,100微升pH2.8的IgG洗脱液在1升pH9.4的缓冲液中只需不到10分钟即可平衡到pH9.4。如果在装缓冲液的烧杯底加磁力棒搅拌则更能加速透析速度。这种方法有较高的回收率,能够节约珍贵的样品,并能节约时间,特别适合摸条件的预实验。根据半透膜的孔径和分子量截留值(分离范围)可分为3种规格:3.5K MWCO、7K MWCO和10K MWCO。
自Thomas Graham 1861年发明透析方法至今已有一百多年。透析已成为生物化学实验室最简便最常用的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中,除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。
透析只需要使用专用的半透膜即可完成。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”,袋(膜)外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。截留分子量MwCO通常为1万左右。