用的是T-simple吗？如果不是simple载体，有可能切开的不是你引入的的没切位点，而是载体本身的
为啥要连到T载体上做双酶切 直接切不就得了 跑胶只是看个大概的大小啦 不准的 变大几百都算正常 只要你测序没问题就可以了
