想请教一个PCR基本问题。 PCR时，目标基因的核苷酸序列是未知的，那我们设计引物是根据其近缘种的基因设计

2024-12-26 18:48:03

推荐回答（5个）

回答1：

可以根据其其近缘种的保守基因序列设计，但通常都很难得到全长。要得到基因全长，可先得到中间片段序列，然后RACE或者Inverse PCR都可以尝试下。如果近缘种序列同源性很高，还可以参考其他物种序列，设计几对引物，直接扩增基因全长。

回答2：

引物一和引物二以及互补序列都可以用DNA合成仪合成，把引物一和引物二的互补序列分别连接到目标基因的两条链上。PCR结束再用限制酶把引物部分切除。

回答3：

PCR的条件是已知目的基因的核苷酸序列不知道目的基因的序列怎么添加引物啊？

回答4：

可以通过蛋白质测序得到蛋白的一级结构即氨基酸序列，然后去database中blast到同源性最高的蛋白，可以根据这个蛋白的基因设计引物

回答5：

不一定可以得到全长的基因，如果要得到全长的，可以用RACE技术来的到全长。