荧光定量PCR步骤

请教荧光定量PCR的步骤,谢谢!
2024-11-26 02:19:10
推荐回答(3个)
回答1:

博凌科为-为你解答:如果lz确实已经确定该基因SNP位点以及突变型,你可以选择荧光定量PCR进行检测,检测方法是:1、探针设计在突变位置,有几个突变点设计几个(不同突变型需要不同的荧光标记:例如,野生型探针用FAM、其中一个突变点探针用VIC或者HEX、另外的一个突变探针用TET等等);2、然后在突变点两端设计引物(大概100-150bp就可以了。如果用MGB探针,可以小于100bp);3、然后就是用能进行GenoTyping的荧光定量PCR仪器了(ABI的7700、7900等都可以);实验操作么就是常规的荧光定量(Realtime)+读取分型(Allelic Discrimination)两个操作,按照不同PCR仪器的说明书操作即可;4、分析,就可以用软件分析扩增曲线和分型图谱,两者联合判断该样本的基因型就好了。

回答2:

首先确定你的试验方法,是用荧光染料还是探针,确定之后,设计引物(如果用探针,还要设计探针),然后确定你的实验方案,是否做梯度,是否做重复,是否有待优化等等,然后根据设计加入体系,然后PCR仪进行运行,分析结果。

回答3:

荧光定量PCR检测仪操作视频-霍尔德