细胞传代密度均匀,有以下3点比较重要(齐氏生物推荐参考丁香通网友回答)
1.尽量消化细胞分散成单细胞悬液。对于易于消化的细胞,我一般DPBS清洗一遍,加0.5ml胰酶润洗一遍(25cm2培养瓶或6孔板),弃掉胰酶,37度消化2-3分钟或室温消化5min左右,镜下观察是否细胞消化较为分散。如果不够,延长消化时间。我见过有些刚进实验室的师弟师妹,一上来就加1-2ml胰酶,结果细胞团大片脱落,虽然有后续吹打步骤,但我觉得效果不佳。至于难消化的细胞,怎么掌握分寸,还待自己摸索或其他战友分享。
2.在以上基础上,我觉得细胞吹匀,这步比上述提到的十字移动等更为重要。如传代1:4 ,可以收集所有细胞至离心管,加入培养液重悬混匀,吸管缓慢吹打20-30次,可配合水平摇晃离心管。
3.此外我觉得培养液的量可能也会有讲究,如6孔板中你最终加入2ml细胞悬液,尤其像这样的小面积培养皿,液体表面有张力,细胞易于聚集在中间,所以我一般6孔板再加1ml以消除影响,吸管缓慢吹打15-20次左右继续混匀。