(1)无菌操作规程
① 接种前对接种箱(室)进行清洁消毒,并准备好接种用具。
② 将待接种的培养基放入接种箱或室内架子上,用药物熏蒸或紫外线杀菌灯消毒。
③ 换好清洁的衣服,用新洁尔灭溶液清洗菌种容器表面及棉塞,同时洗手;然后将菌种带入接种箱(室)内。
④ 取少许药棉,蘸上75%酒精擦拭双手、菌种容器表面、工作台及接种工具。
⑤ 点燃酒精灯,开始接种操作。因火焰周围8~10厘米直径范围内的空间为无菌区,所以接种操作必须靠近火焰,但注意不要烫伤菌种。
(2)接种方法
① 一级种接种:按上述要求做好无菌操作准备以后,首先拔去菌种棉塞,夹在右手指缝间或放在酒精灯旁的酒精棉上,试管口放在火焰上转动烧灼2~3圈;然后拿接种针蘸酒精,在火焰上灼烧,冷却后挑取少许菌种,放入适宜的培养基表面;最后将棉塞在火焰上通过塞入管口,即完成接种操作。
② 二级种接种:按无菌操作规程做好准备后,取一级种一支,拔去棉塞,在酒精灯火焰上灼烧管口,放在台面上;再取装有二级种培养基的瓶子拔去棉塞横(或竖)放在台面上,用接种针取一块一级种放入培养基瓶中,将棉塞过火后塞入瓶口即成。
③ 生产种接种:做好无菌操作准备后,取二级种拔去棉塞,去掉老菌种块,灼烧瓶口,横放在台面上;另取装有生产种培养基的瓶子,拔去棉塞,用医用镊子或汤匙取一块二级种放入瓶中,将棉塞过火后塞入瓶口即成。