肾蕨可用分株和孢子繁殖,但以分株为主。
肾蕨分株多在春季新叶未萌发之前结合换盆进行,将根状茎分割开,每丛带有2~3个匍匐茎、叶丛和不定根,将其栽在培养土中、压实、浇足水,放于半阴处保持盆土潮湿;亦可用根状茎顶端小苗,长到10厘米左右时移栽到小盆中,成为新植株。目前国际上销售的肾蕨是用根状茎顶尖作组织培养繁殖的。其方法是:切取根状茎顶端2厘米,用湿润剂(100毫升/水加几滴吐温60)和外植体一起振荡2分钟,将湿润剂倒去在超净工作台将外植体放入10%次氯酸钠溶液中消毒10分钟,用无菌水冲洗3~5次,切取茎尖1厘米,垂直接种在MS培养基加磷酸二氢钠170毫克/升,含激动素0.05~0.5毫克/升;根诱导在MS无激素培养基基础上,温度25±2℃,光照2.5千勒克斯,16小时光照,8小时黑暗。
亦可用孢子繁殖。过去用直径0.5厘米的泥炭土,在高压锅中灭菌1小时,盆与温室亦要严格消毒,将孢子叶平铺在消毒的盆土表面,孢子向下,轻微压紧,套上塑料薄膜袋,保持18~24℃温度,相对湿度90%以上,在温室微光处,干旱时用浸水法补水,1~2个月后,孢子可生根、发芽长出小植株。现在都用1平方厘米的滤纸小包,先在70%的酒精中浸15~30秒,用镊子将滤纸包中的气泡赶净,放入0.1%升汞中灭菌3分钟,再用无菌水冲洗4~5次,在无菌条件下将滤纸包在无菌培养皿中打开,用接种环将孢子接种到培养皿表面,播种密度每平方厘米3000个为宜。孢子采集是孢子囊深棕色或黄色,已成熟未散落时,将叶片剪下放入干净对折的报纸中,在温暖的干燥室让其自然落到报纸上。培养用1/2MS培养基加粉末状活性炭0.25%~0.5%,pH5.7~5.8,加蔗糖2%~3%,在23±2℃,500~1000勒克斯光照下,照光12~16小时。