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谁能详细地说一下southern blot的的原理和有什么应用吗？

2025-03-11 21:14:09

推荐回答（5个）

回答1：

1、原理：

Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。其基本原理是：具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下，可按碱基互补的原则特异性地杂交形成双链。

一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进行杂交，用放射自显影或酶反应显色，从而检测特定DNA分子的含量。

2、应用：

（1）遗传病诊断；

（2）DNA图谱分析；

（3）检测样品中的DNA及其含量：先将DNA样品(含不同大小的DNA片段)先按片段长短进行分离，然后进行杂交。这样可确定杂交靶分子的大小。

（4）PCR产物分析。

扩展资料

Southern印迹杂交技术的过程：

Southern印迹杂交技术包括两个主要过程：

一是将待测定核酸分子通过一定的方法转移并结合到一定的固相支持物（硝酸纤维素膜或尼龙膜）上，即印迹（blotting）；

二是固定于膜上的核酸与同位素标记的探针在一定的温度和离子强度下退火，即分子杂交过程。该技术是1975年英国爱丁堡大学的E.M.Southern首创的，Southern印迹杂交故因此而得名。

早期的Southern印迹是将凝胶中的DNA变性后，经毛细管的虹吸作用，转移到硝酸纤维膜上。印迹方法如电转法、真空转移法；滤膜发展了尼龙膜、化学活化膜（如APT、ABM纤维素膜）等。

利用Southern印迹法可进行克隆基因的酶切、图谱分析、基因组中某一基因的定性及定量分析、基因突变分析及限制性片断长度多态性分析（RFLP）等。

参考资料来源：百度百科-Southern印迹杂交技术

回答2：

southern blot是Southern这个人发明的，是“核酸杂交技术”结合“核酸印迹技术”的经典实验。
大致原理是：不同来源的核酸分子，经变性、退火处理，当它们之间有碱基互补配对时，就可能会结合在一起。形成DNA/DNA，DNA/RNA杂交体。那么我们可以根据这个原理，设计针对目的DNA的核酸探针（常见的有cDNA探针、RNA探针、寡核苷酸探针等），探针上标记了相关的标记（同位素标记、地高辛标记等等）。

大致的实验过程是：southern blotting最开始要将全基因组DNA酶切成许多小片段。然后跑凝胶电泳。然后是核酸印迹（就是把凝胶上的DNA原位不动的印迹到一张可以吸附DNA的膜上，常见的有尼龙膜、硝酸纤维素膜等），印迹的方式有一些不同，最经典的是采用虹吸印迹。然后通过紫外交联或者120℃烘烤30分钟的方法将核酸固定。然后用核酸探针去杂交这张膜。然后杂交完毕后就是显色的步骤了（根据探针上面标记的不同有放射自显影、底物显色、化学发光等）。
中间稍微省略了一些细节，具体每一步操作你要看说明书。

那么southern究竟可以用来干什么呢？稍微总结了三点：
1、限制性片段长度多态性（RFLP）的检测，可以检测点突变。看杂交的条带的不同。
2、目的基因的拷贝数。看杂交的丰度值。
3、测目的基因的大小。看显色带在膜上面的具体位置。
其他的可能还有一些，不一一列举。

最后说明一下，southern是用来做DNA实验的，northern是用来做RNA实验的，western是用来做蛋白实验的。

纯手打，再加点分呗。

回答3：

紫外交联仪可用于Northern、Southern blotting、EMSA等膜交联，当使用254 nm波长、能量为120.0mJ/cm2交联时，尼龙模的氨基和DNA的胸腺嘧啶（或RNA的尿嘧啶）之间形成共价键最稳定。
（1）将一张或两张用转移缓冲液（如10×SSC）轻轻润湿的吸水纸放在VL系列紫外交联仪的样品腔。将尼龙膜放在吸水纸上，使附着核酸的一面朝上，使紫外线灯管能够直接照射核酸。
（2）关闭VL系列紫外交联仪的门。
（3）按下Run/Pause（运行/暂停）按键启动，当紫外线灯管亮时，显示屏将立即开始从输入值开始累计。如果在曝光期间的任何点打开门，照射将停止，并显示已曝光值。（关上门按Run/Pause按键继续照射。）
（4）辐照完成后，蜂鸣器将鸣响约3–4秒。自动交联大约需要25–50秒。
（5）取下尼龙膜并关上门，交联完成。每次使用后，清洁紫外线交仪样品腔，以清除残留的盐。使用UVA(365nm)、UVB(302 nm)、UVC(254 nm)三种波长制造了四款紫外交联仪，主要包括VL-1000A系列紫外交联仪（365nm）、VL-1000B系列紫外交联仪（302nm）、VL-1000C系列紫外交联仪（254nm）、VL-3000系列紫外交联仪（三种波长）满足不同的科研需

回答4：

基本原理的描述不是southern bolt而是凝胶电泳分离技术啊

回答5：

　　一、Southern印迹杂交(Southern blot)是1975年由英国人southern创建，是研究DNA图谱的基本技术，在遗传病诊断、DNA图谱分析及PCR产物分析等方面有重要价值。
　　二、基本原理
　　Southern印迹杂交是先将DNA样品(含不同大小的DNA片段)先按片段长短进行分离，然后进行杂交。这样可确定杂交靶分子的大小。因此，制备DNA样品后需要进行电泳分离。在恒定电压下，将DNA样品放在0.8~1.0%琼脂糖凝胶中进行电泳，标准的琼脂糖凝胶电泳可分辨70-80000bp的DNA片段，故可对DNA片段进行分离。但需要用不同的胶浓度来分辨这个范围内的不同的DNA片段。原则是分辨大片段的DNA需要用浓度较低的胶，分辨小片段的DNA则需要浓度较高的胶。经过一段时间电泳后，DNA按分子量大小在凝胶中形成许多条带，大小相同的分子处于同一条带位置。另外为了便于测定待测DNA分子量的大小或是所处的分子大小范围，往往同时在样品邻近的泳道中加入已知分子量的DNA样品即标准分子量DNA (DNA marker)进行电泳。DNA marker可以用放射性核素进行末端标记，通过这种方式，杂交后的标准分子量DNA也能显影出条带。
　　三、主要应用
　　1.遗传病诊断
　　2.DNA图谱分析
　　3.检测样品中的DNA及其含量
　　4.PCR产物分析