1.封闭用2%bsa。2.二抗孵育半小时就够了，多了反而背景高。3.二抗孵育结束的洗板很重要，这一步的洗涤一定要干净。包括放置太久长菌的pbst残留液都会引起假阳性。4.机洗，手洗？手洗拍板，垫的纸脏的话也有影响的，特别是如果纸屑多还含荧光剂。
