根据引物的Tm值，在附近5~10度做一个退火温度的梯度吧!大部分的PCR仪器都有这一功能!PCR仪器在一排（12个孔）或一列（8个孔）中每个孔的温度都不同,你在相应的孔中放入待反应的PCR混合液（保证每孔中反应液一致）,记录相应的温度,PCR产物经琼脂糖凝胶或PAGE凝胶电泳检测目的产物浓度,有无非目的产物，目的条带亮度高低，有无引物二聚体，有没有非特异性扩增条带等。选择最优一个温度作为退火温度即可
